染色原理:

荧光标记物如二甲酚橙、钙黄绿素、盐酸四环素等通过化学基团与骨矿化中的钙离子螯合，形成稳定荧光复合物，便于直观、定量地分析骨形成动态。

溶液配制（可根据实际使用按比例调节各试剂含量）

1、钙黄绿素配制：

1）先配置2%的碳酸氢钠溶液(1 g碳酸氢钠加50 mL水)，搅拌溶解；

2）称取0.25 g钙黄绿素，加入48mL配好的2%碳酸氢钠溶液；

3）加2 mL1当量盐酸，充分搅拌，溶解；

4）0.22细菌过滤器过滤；

注意：1当量盐酸配制方法：将浓盐酸(37%)稀释12倍即可。

2、二甲酚橙配制：

取2.5 g二甲酚橙加入46 mL生理盐水溶，加入4 mL 1当量盐酸，过滤。

3、盐酸四环素配制：

取1.5g盐酸四环素加入50mL生理盐水，搅拌溶解，可通过碳酸氢钠或者稀盐酸调节ph约为7，过滤。

注射方法与剂量

使用时，可通过腹腔或静脉注射（兔子耳缘静脉注射，大小鼠腹腔注射），注射剂量为2 mL/kg。在动物处死前选择等间隔时间注射，以观察不同阶段的骨形成及矿化速率。每种药打一次即可。建议按照钙黄绿素-二甲酚橙-盐酸四环素的顺序注射。

案例展示