实验原理

• 更准确——无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完整；
• 更简单——无需抗原抗体反应，基于小分子化学反应的检测方法，简单高效，反应仅需要几分钟；
• 更灵敏——无需抗体，检测染料仅为BrdU抗体的1/500，更容易扩散，即使单个增殖细胞也能准确检测；
• 更快速——无需过夜，省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤，完成整个检测周期仅需2.5小时；
• 更兼容——对样品几乎无损伤，更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。

1. 在收集细胞固定前加入终浓度为的50μM的EdU于培养基中，置37°C，5%的CO₂细胞培养箱孵育2h（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）；
2. 弃培养液，PBS清洗细胞两次，每次5min；
3. 4%多聚甲醛固定10min；
4. 加入PBS脱色摇床上孵育，每次5min；
5. 每孔加入100μL 的1×Apollo染色反应液，避光，室温摇床上孵育30min；
6. 每孔每次加入100μL渗透剂（0.5% TritonX-100的PBS）, 摇床上孵育次，每次10min；
7. 每孔每次加入100μL甲醇冲洗1次，每次5min；PBS 500μL摇床5 min；
8. 用去离子水按100:1稀释试剂F, 制备适量1×Hoechst33342反应液，避光保存；
9. 每孔加入100μL 1×Hoechst33342反应液，避光，室温摇床上孵育30min；
10. 每孔每次加入500μL PBS摇床孵育两次，每次5min，洗脱Hoechst33342反应液；染色完成后，立即在荧光显微镜下进行观测。

案例展示