染色原理

• 苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木素染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

染色步骤

石蜡切片组织包埋，切片和HE染色

1. 取新鲜组织厚度不超过5mm，置于4%多聚甲醛或者10%的中性福尔马林固定大于48h后，取出置于包埋盒中，并用铅笔做好标记；
2.  固定后自来水冲洗1-2h；
3.  脱水透明 --二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →80%乙醇(5min) →75%乙醇(1h) →85%乙醇(1h) →90%(3次，共1h) →95%乙醇(3次，共1h) →无水乙醇(3次，共1h) →二甲苯（2次，共1h）；
4. 石蜡浸泡，3次，共2h，最后将包埋盒置于新蜡中用包埋机包埋；
5. 包埋结束后，待蜡块冷却后，将蜡块置于冰上，于切片机上切片，切片厚度一般为4-5um。漂片温度为42℃，摊片温度为65℃左右，待切片上多余的石蜡烤干后，将切片置于切片盒中室温保存；
6. 石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2-3h，防止脱片；
7.  脱蜡和水化：二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min)  →75%乙醇(5min)；
8. 蒸馏水冲洗2次5min；
9. Mayer氏苏木素，1min；
10. 自来水冲洗，5-10min；
11. 75%盐酸酒精，1-2min，自来水冲洗30s；
12. 伊红复染1-2min，自来水冲洗30s；
13.  脱水、透明，步骤2反向进行；
14. 封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。

染色结果

• 细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色，细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

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