实验原理

• 细胞划痕（Wound Healing）是测定肿瘤细胞的运动特性的方法之一，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。

实验步骤

 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

1. 先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5～1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过3条线；
2. 在空中加入约5X10⁵个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则是过夜后融合率达到100%， 37℃，5％CO₂的细胞培养箱中培养；
3. 第二天用10µL枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜；
4. 用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基；
5. 放入37℃，5％CO₂的细胞培养箱中培养，按0，6，12，24h倒置显微镜观察，拍照。

注意事项

1.  在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁缓慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果；
2. 一般做划痕实验，都是在无血清或者底血清状态下培养的，否则细胞增殖就不能忽略。按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，这就解决了前后观察时位置不固定的问题；
3. 实验时应注意细胞生长状态，选择适当的细胞接种浓度，对不同的细胞药观察细胞的贴壁率等，确定实验室细胞的接种数量和培养时间，保证培养终止时密度适当。

数据处理

• 每个时间点的距离长度-0时距离=每个时间长度细胞整体迁移的距离，求出均数和标准差，时间为横轴，迁移距离为纵轴（单位mm）作图，并比较初始0时与实验结束时实验组和对照组的照片。

案例展示