Calcein-AM/PI细胞活死双染
来源：细胞生物学研究平台
实验原理
- Calcein-AM可透过细胞膜，通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团，产生的Calcein (钙黄绿素) 发出强绿色荧光，因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。
- PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光，因此死细胞会被检测到红色荧光。
- Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞；而用 545nm 激发，仅可观察到死细胞。
- 本染色法简便可靠，除荧光显微镜外，也可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。
实验步骤
- 用Trypsin-EDTA消化细胞；
- 通过离心收集细胞（1,000rpm，3min）；
- 去除上清液，加入PBS制备细胞悬液（105 - 106 cells/ml为宜）；
- 重复步骤2和步骤3消除培养基中的酯酶活性；
- 取100μL染色工作液与200μL细胞悬液混合，在37℃培养15min；
- 在490±10nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545nm激发波长单独观察死细胞。
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