染色原理

• 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，在免疫学、生物化学和显微技术的基础上建立起来的一项技术，是利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

染色步骤

• 冰冻切片动物一般需要灌注；
• 冰冻包埋--取组织放在含有OCT包埋剂包埋；
• 冰冻切片--将OCT包埋的组织在-30°C的Chamber temperature（CT）及-20°C的object temperature（OT）下切片；切片室温干燥过夜，置-20°C冰箱保存。

免疫荧光染色

1. 实验时取出切片，恒温干燥箱中60°C干燥20 min；
2. 用含3% TritonX-100的PBS室温下洗3次，每次5 min；
3. 用含3% TritonX-100及5% FBS的封闭液（Blocking buffer）常温下封闭1 hr；
4. 4 ℃下孵育一抗过夜；
5. 常温下PBS洗3次，每次5 min；
6. 常温下孵育荧光二抗2 hr;
7. PBS洗3次，每次5 min；
8. 用5 µg/mL DAPI工作液在常温下孵育5min；
9. 再PBS常温下洗3次，每次5 min；
10. 抗瘁灭剂封片剂封片，37°C烘箱中稍作烘干直到盖玻片不自行滑动；
11. 荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜采集图片。

案例展示