实验原理

• 尼罗红不溶于水，可溶于多种有机溶剂并发出荧光，对甘油三酯，胆固醇脂具有高亲和力，在疏水环境中是最理想的脂质荧光染料；尼罗红也可以和磷脂结合，使细胞膜着色；也可染色其它疏水分子如疏水蛋白等。

样本处理

1. 冷冻切片: (1)4%组织细胞固定液固定 10min。 (2)蒸馏水洗 3 次，每次 3min。
2. 培养细胞固定: (1)4%组织细胞固定液固定 10min。 (2)蒸馏水洗 3 次，每次 3min。
3. 活细胞:用无血清和白蛋白的培养基洗涤细胞，除去血清和白蛋白。

染色步骤

1. 尼罗红染色工作液准备:临用前，将尼罗红脂肪荧光染色液(500X)于离心机 1200rpm 离心 2min， 根据需要吸取适量染色液，用 PBS 缓冲液或无血清和白蛋白的培养基以 1:500 一次性稀释即为尼罗红染色 工作液。
2. 固定细胞:入尼罗红染色工作液，染色 5-10 分钟，蒸馏水洗涤一次，立即观察。(选择恰当的染色时间避免背景染色，一般情况下，染色时间>30 分钟，背景弥散强)
   活细胞:将尼罗红脂肪荧光染色液(500X)直接加入无血清培养液中(建议稀释比例 1:500)，染色 5-10 分钟，收集细胞，用 PBS 洗涤一次，立即观察。

染色结果

1. 用 365nm 波长激发，细胞核为蓝色，脂滴为黄色(图 C)
2. 用 492-577nm 波长激发，细胞呈红色，且无变形(图 B)
3. 用 435nm 波长激发，细胞呈绿色，分辨率高(图 A)

案例展示