实验原理

• 侵袭性伪足指的是恶性肿瘤细胞膜形成的一种向外凸起的、具有降解细胞外基质能力的的细胞-细胞外基质接触性结构。侵袭性伪足在癌细胞侵袭正常组织、造成局部或远隔转移的过程中起到关键作用。

实验步骤

第一天

1. 将细胞爬片置于孔板中加入多聚赖氨酸溶液包被；   
2. FITC-gelatin加入无血清培养基溶解，置于37℃预热，室温包被盖玻片； 
3. 倾斜盖玻片，吸除多余的  FITC-gelatin 溶液；
4. 每孔加入戊二醛，室温固定，PBS 溶液轻柔漂洗；
5. 加入预冷的硼氢化钠溶液， PBS 溶液轻柔漂洗；
6. 以酒精常温处理玻片；  
7. 将处理后的盖玻片转移至无菌的孔板中，之后的操作均为无菌操作；   
8. 将无血清培养基加入孔板中， 37℃恒温孵箱中孵育；
9. 将生长状态良好的细胞消化稀释至合适细胞浓度，孔板中每孔种植细胞，3 7℃恒温孵箱中常规培养；
10. 以 4%多聚甲醛溶液固定；
11. 弃多聚甲醛溶液， PBS 溶液轻柔漂洗；  
12. 以 Triton/PBS 溶液透化，常温；  
13. 弃 Triton 溶液， PBS 溶液轻柔漂洗；   
14. 以 BSA 封闭溶液于封闭过夜。   

第二天

1. 弃封闭液， PBS 溶液轻柔漂洗；
2. 鬼笔环肽加入的DMSO溶解成原液，使用1×浓度进行细胞骨架染色；
3. 弃鬼笔环肽，PBS 溶液轻柔漂洗；
4. 封片剂封片；
5. 先于荧光显微镜下简单观察，置于4℃避光保存；
6.  激光共聚焦拍照。

案例展示