实验步骤

1. 细胞在含有 10%胎牛血清FBS，100U/mL 青霉素和100U/mL 链霉素的 DMEM 培养基中37°C，5%CO₂ 培养箱中培养;
2. 胰酶消化，计数，以 3-5×10⁵cells/well 接种到 12 孔板中，每孔 1mL，37°C孵育过夜;
3. 次日，移去细胞培养基，用PBS清洗一次，换成含10%FBS但无抗生素的 DMEM培养基培养;
4. 用含10%FBS无抗生素的DMEM培养基调整对数期的绿脓杆菌及其突变株OD₆₀₀ 为 0.1(约 1×10⁸cells/mL);
5. 按照约 10:1 的感染复数(MOI)将制备好的细菌悬液分别取 20μL 加入 12 孔板中 (设置两个空白对照)，37°C，5%CO₂ 孵育 1h;
6. 移去培养基，用PBS清洗3次，每孔加入1mL含10% FBS和150ng/mL庆大霉 素的 DMEM培养基，37°C孵育 1h，用以出去胞外绿脓杆菌;
7. 用 PBS 清洗两次，每孔加入 1mL 0.5 % Triton X-100，常温裂解 10-20min;
8. 在 96 孔板中用 PBS 10 倍梯度稀释，稀释 4 个浓度梯度，取 10μL 稀释液滴加到 LB 平板上，37°C倒置过夜培养，次日计数; 

案例展示