实验原理

• 罗丹明123（Rhodamine 123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。Rh123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。
• 而在凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm)的崩溃, Rh123重新释放出线粒体,发出的黄绿色荧光逐渐减弱，可用流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生。

实验步骤

1. 收集传代培养的处于对数生长期的细胞以2×10⁴cells/well播种于6孔板中，每孔2mL含细胞的培养基,将6孔板置于37℃，5%CO₂细胞孵箱中培养24h后。加入不同浓度的药物，同时设置空白对照组，（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）；
2. 继续将6孔板置于37℃，5%CO₂细胞孵箱中培养，去除细胞培养液，收集细胞于流式管中，冷PBS洗两次，重悬细胞于5µg/mL的Rh123中，在37℃,5%CO₂细胞孵箱培育条件下孵育30min，用冷PBS洗2次，再用500µLPBS重悬细胞，通过用流式细胞仪检测荧光强度来检测细胞线粒体膜电位的变化。

案例展示