实验原理

• 细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）;
• 由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N）,而S期的DNA含量介于2N和4N之间;
• PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

实验步骤

1. 收集传代培养中处于对数生长期的细胞以2×10⁴cells/well的细胞密度接种于6孔板中，24h后加入不同浓度的药物处理（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）；
2. 收集细胞于流式管中，1500rpm/min，离心3min，去除培养液，冷PBS洗细胞两次，每个样本用500µL的75%冰乙醇固定细胞30min以上，固定细胞时需缓慢逐滴加入乙醇，并不断震荡确保悬浮均匀；
3. 第二天用碘化丙啶 (PI)染料染色后，用流式细胞仪于FL-2通道检测周期分布

案例展示