流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平
来源：细胞生物学研究平台
实验原理
- 活性氧（ROS）是指生物体内与氧代谢有关的含氧自由基和易形成自由基的过氧化物的总称，可以利用荧光探针DCFH-DA进行检测的。
- DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被积聚在细胞内。
- 细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。可以通过用流式细胞仪检测荧光强度来检测细胞内活性氧水平。
实验步骤
- 收集传代培养的处于对数生长期的细胞以2×104细胞密度接种于6孔板中，24小时后，以不同浓度的药物处理，同时设置空白对照组，（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）
- 继续将6孔板置于37℃，5%CO2细胞孵箱中培养72h，去除细胞培养液，收集细胞于流式管中，冷PBS洗两次，加入终浓度为10µmol/L的荧光探针DCFH-DA，在37℃ , 5%CO2细胞孵箱培育条件下孵育30分钟，
- 冷PBS洗两次，再用500µLPBS重悬细胞，用流式细胞仪检测。
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