内皮细胞小管形成实验（Tube formation assay）
来源：细胞生物学研究平台
实验原理
- 小管形成实验能模拟人体内毛细血管生成的过程，包括内皮细胞出芽增值和毛细血管网结构形成等步骤，接近人体血管生成的实际过程；
- 内皮细胞在基质胶、纤维蛋白胶、胶原等基质上培养时能形成网状结构，用电子显微镜来分析小管间的紧密连接，从而定量血管生成情况。
实验步骤
- 第一天Matrigel放入4℃冰箱过夜。
- 第二天待Matrigel冻融后，准备进行分装。
- Matrigel用预冷枪头混匀，冰上操作，EP管提前预冷，每500ul分装。
- 96孔板提前预冷，每孔加入50µL Matrigel，避免产生气泡。在37℃孵箱放置45分钟左右。
- 当细胞长到80-90%时，消化下来，并用含10%FBS的DMEM重悬，每孔加入100µL重悬液，试了两个浓度梯度，分别为1×104 cells/well和2×104cells/well，设置三个重复孔。
- 37℃孵箱孵育，分别在6小时和12小时镜下观察并拍照。（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）
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