实验原理

• 细胞迁移/侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室；
• 上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。

实验流程

实验步骤

1. 无菌条件下Matrigel于冰浴融化，在PBS（或者DMEM only培养基）稀释成1mg/ml浓度，-20℃冻存备用；
2. 取出已经稀释好的Matrigel，冰浴融化，以50mL的体积铺于Transwell小室（24孔板）聚碳酸酯膜上（注意：体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜膜浸湿为最好），37℃放置1h，使Matrigel聚合成凝胶（注意：加基质胶时最好将24孔板放置在冰盒上，确保胶完全覆盖孔底，不要有气泡）；
3.  每孔加入200μl培养基使胶重构；
4. 在Transwell下室中加入趋化因子或10%FBS培养基600μl/well；
5. 在上室中准确加入细胞1×10⁵个/孔，细胞悬液体积200μL，置于37℃，5%CO₂的细胞培养箱中培养24h（注意：细胞数量和时间根据实验条件摸索）；
6. 待培养时间结束后，弃去上室液体，小心取出上室，用湿棉签擦去膜上未穿过膜的细胞；
7. 4%中性甲醛固定10min，Giemsa染色10min，PBS洗涤3次，干燥，取下微孔滤膜，倒置显微镜下直接观察穿过膜的细胞；
8. 每张膜中央部分和周围部分各随机取3个视野，计数每个视野内的穿过8μm微孔的细胞数目。

案例展示