实验原理

• 免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)；
• 在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光，可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位。

实验步骤

1. 在细胞培养板培养板中的爬片用PBS洗1次，每次3min；
2. 用4%多聚甲醛固定爬片10min，用PBS洗1次；
3. 用0.3%Triton-100（PBS配制）室温通透15min；
4. 用PBS洗玻片1次，吸干PBS，在玻片上滴加BSA（5%），室温封闭30min；
5. 吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加稀释好的一抗并放湿盒过夜；
6. 第二天以下操作在暗室操作；
7. 回收一抗；
8. 加荧光二抗，PBS润洗爬片3次，每次3min，吸光低吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中室温孵育1个小时PBST洗3次，每次3min。
9. 复染核；
10. 洗干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭的封片液封片，然后在荧光显微镜下采集图像。

案例展示